细胞培养
细胞生长和培养是克隆筛选最基本的步骤。细胞健康对于目标蛋白的产生至关重要。贴壁细胞和悬浮细胞均必须在无菌环境中生长，以确保不会引入任何污染物，以免致使该批细胞无法使用或降低后续分析的完整性。除无菌环境之外，补充到细胞中的生长培养基和营养物也必须无菌，否则会有污染风险。
颇尔实验室为细胞培养应用提供了完整的 0.2 µm 无菌级过滤欧洲杯线上买球的解决方案，适用于细胞培养应用，进料体积从少量的几毫升到超过 100 升。我们专有的双层膜可快速高效地过滤富含营养的培养基、饲料和补充剂。颇尔过滤介质具有低蛋白结合性，从而确保在无菌过滤过程中，有价值的营养物质不会流失。无菌针头过滤器使得可以在无污染风险的情况下，在监测培养物生长时采集少量样本进行评估。
支原体是细胞培养物中常见的污染物，但常规实验室方法不易识别。使用我们的 0.1 µm supor® 支原体减少膜可最大程度地保证限制潜在支原体通过血清或含血清培养基进入细胞培养物。颇尔实验室拥有的过滤器产品可满足整个细胞传代和生物反应器培养过程中大多数工作流程需求。
在收获细胞培养物以提取细胞外蛋白的过程中，需要进行澄清以在无菌过滤和纯化之前去除培养基中的细胞、细胞碎片和大蛋白聚集体。如果不去除，细胞膜的磷脂双层会在下游纯化步骤中引起问题，从而降低蛋白质产物的质量和数量。若容量较大，通过离心分离可能很麻烦。此外，溶液澄清度不佳会导致无菌过滤过程中发生堵塞，从而减慢工作流程。在澄清过程中和灭菌之前使用小孔过滤器可降低成本并提高产物回收率。在单克隆抗体 (mab) 工艺开发的早期，针对特定的细胞培养物，以最合适的技术建立性能最强的收获过程至关重要。所选技术的可扩展性是实现从小容量到数升体积无缝过渡的关键，并且为确保获得预期可再现的结果，工艺操作过程的变化应极小。
颇尔实验室提供一系列具有堆叠式和集成式高性能深度介质的深层过滤囊氏滤器，旨在有效去除颗粒污染物并在下游处理之前澄清溶液。深度过滤可有效处理高细胞数的浓缩溶液，例如细胞培养物和发酵液等。过滤器结构中新增了第三维度，即厚度，可以有效地捕获表面和整个过滤介质深度中的颗粒物。正确选择过滤器类型可去除大小不同的细胞（例如细菌、酵母和哺乳动物细胞等），并澄清细胞碎片或细胞裂解液。我们的 supracap™ 深层囊氏过滤器经过优化，可满足生物学和制药要求，并且具有可扩展性，可满足 gmp 生产要求和规模。颇尔设计了一种澄清细胞培养基的系统，非常适合于单克隆抗体 (mab) 的生产，将 pdp8 supracap 过滤器与 pde2 supracap 过滤器串联放置，其配置与 pall stax™max 澄清工作台相同，可一次处理几百升培养基。
由于生物制药的性质，无法实现最终灭菌，因此通过 0.2 µm 过滤器进行有效的无菌过滤对于确保在下游处理之前去除生物污染至关重要。无菌过滤将降低溶液中微生物后续生长的风险，从而增大纯化目标蛋白之前样品的稳定性。
选择合适的过滤系统可显著提高工作流效率，并降低成本。选择一个对优化后的过滤参数进行扩展，以满足商业要求的系统可以降低由于后期已建立流程发生变化而对产品的关键质量属性产生影响的风险。
在颇尔实验室，我们可以帮助您从我们的各种高性能双层无菌过滤器中选择适合于您应用的最优过滤系统。我们的过滤器可以缩短过滤时间、提高产量、减少多次更换过滤器的需求，并节省总体过滤成本。
我们的 acropak 囊式过滤器产品有效过滤面积 (efa) 从 20 cm² 到 1,500 cm² 不等。提供三种膜可供选择，配置可按比例扩大至用于中试和全规模生产的产品。
带有 supor® pes 膜的 acropak 产品可快速处理难以过滤的溶液，如粘稠溶液或含大量颗粒物的溶液。supor 膜流速较高，并且相较于其他大多数膜，孔隙率更高，因此总溶液通过量始终更高。这种膜是需要提高过滤速度或缩短处理时间、或者需要低蛋白结合的情形下的理想之选。
克隆优化中纯化步骤的目标是提高目标生物分子的回收率，以便进行详细的功能分析。通过一系列色谱步骤可以去除全细胞蛋白、dna 或不需要的 mab 变体等各种污染物。在纯化之前浓缩溶液，可以加快过程并降低成本。
为确保纯化或分析、渗滤所需的溶液中有目标蛋白，可以在色谱步骤之前或之后执行同时进行缓冲液交换和浓缩的过程。
通过颇尔实验室的切向流过滤 (tff) 系统进行超滤，可实现在同一系统上进行高效处理、浓缩和渗滤（脱盐或缓冲液交换），并且极少需要用户干预。采用优化的流道设计，外加蛋白结合率低的膜，可以尽量减少非特异性结合，从而提高产品回收率。我们可扩展的 tff 囊氏系列性能可预测，在扩展流程时节省了时间。可以在一个被称为“连续渗滤”的过程中同时进行浓缩和缓冲液交换，这样可节省数小时的处理时间。
除鉴别可稳定产生生物治疗性蛋白质的候选克隆外，还对生物分子的纯度、滴度和生物活性进行分析，作为优化生产的迭代过程的一部分。功能分析包括通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (sds-page)、液相色谱-质谱 (lc-ms) 和高效液相色谱 (hplc) 等技术进行的蛋白质转录、表达、结构和细胞相互作用研究。
颇尔实验室提供创新的核酸结合离心设备，简化 lc-ms 或 hplc 分析之前的蛋白质样品制备、gdna 和 mrna 纯化流程。nanosep® 离心过滤器结合了高结合力的创新双层玻璃纤维膜。这种过滤器可实现高质量和高产量，甚至可以回收从 50 bp 至 10000 bp 的片段，支持多个下游应用程序，同时无需处理额外的样品，从而节省时间和资源。
这些膜灵敏度高、背景噪音低，专为蛋白质分析应用（例如蛋白质印迹）设计，可提供清晰的结果。固定化蛋白质可直接用于测序，提高工作流程的灵活性。产品经过优化以减少可萃取物，通过伽马辐照进行预灭菌消除潜在的细胞毒性残留物。